Hoe antilichaamconcentratie Bereken

Een van de meest gebruikte methoden voor het berekenen van een eiwitconcentratie in een laboratoriumomgeving is een Bradford assay gebruikt . De Bradford reagens is een colorimetrische reagens die van kleur verandert op basis van eiwit concentratie. Door het combineren van een bekende standaard curve met de Bradford reagens , kunt u een maatregel waartegen je kunt de concentratie van een eiwit te berekenen , met inbegrip van antibodies.Things Je
Gezuiverd antilichaam in een bekende buffer nodig
Buffer afstemmen van de te creëren opschorting van het antilichaam
Lyophilized bovine serum albumine ( BSA ) op Twitter Microcentrifge buizen
Laboratorium pen en Vortexer
laboratoriumschaal
Weegpapier
1 ml pipet
Bradford reagens
Multi - well plaat
Colorimetric plaatuitleesinrichting
Microsoft Excel te boeken Lab
Pen
Toon Meer Instructions Heb Maak een Standaard
1

meet 200 mg BSA op een gewicht van papier met behulp van een laboratorium schaal. Omsluiten het in een microcentrifugebuis . Voeg 2 ml buffer aan de microcentrifugebuis met de 200 mg BSA . Label deze tube " 1 " het kopen van 2

Vortex buis 1 totdat de BSA volledig is opgelost .
3

Verwijder 500 ul van de BSA in de buffer en de overdracht het aan een tweede buis . Label deze buis "2" Voeg 500 ul van platte buffer om Buis 2
4

Verwijder 200 ul van BSA in de buffer van Tube 1 en overbrengen naar een nieuwe buis . Label deze tube " 3 " Voeg 800 ul van platte buffer om Buis 3
5

Verwijder 100 ul van BSA in de buffer van Tube 1 en overbrengen naar een nieuwe buis . Label deze tube " 4 " Voeg 900 ul van platte buffer om Buis 4
6

Verwijder 10 ul van BSA in de buffer van Tube 1 en overbrengen naar een nieuwe buis . Label deze buis "5" Voeg 990 ul van platte buffer tot Tube 5 Tubes 1- 5 bestaat uit een gesorteerde standaard serie . De eerste buis heeft een bekende concentratie van 100 mg /ml; de tweede , 50 mg /ml; de derde , 20 mg /ml , de vierde , 10 mg /ml; en de vijfde , 1 mg /ml . Elke buis bevat ongeveer 1 ml van de oplossing .
Maak Antibody Verdunningen
7

In 5 0UL van gezuiverd antilichaam tot 95 0UL buffer . Label deze tube " A. "
8

Voeg 10 ul van gezuiverd antilichaam tot 990 ul van buffer. Label deze tube " B. "
9

Voeg 2 ul van gezuiverd antilichaam tot 998 ul van buffer. Label deze tube " C. "
Plaats de plaat
10

Breng 0,5 ml van gewone buffer in de eerste putten in twee kolommen van de multi-well plaat.

11

Breng 0,5 ml van de inhoud van de buis 1 in de tweede putjes van de eerste twee kolommen van de multi-putjesplaat . Ga verder de gesorteerde reeks tot de eerste twee kolommen bevatten 0,5 ml van een BSA standaardoplossing van elk van Tubes 1-5 , met inbegrip van bronnen voor eenvoudige buffer .
12

Voeg 0,5 ml Bradford Reagens elke goed . Zwenk de plaat aan het reagens mengen met de eiwitachtige oplossingen , zorg dat u de inhoud van een van de putten niet te morsen . Wacht 5 minuten .
13

Lees de plaat volgens het protocol specifiek voor uw bord lezer bij een golflengte van 595 nm .
Bereken Antibody Concentratie

14

Kopieer de waarden van de plaat lezer in Microsoft Excel .
15

Maak een grafiek van de twee kolommen met waarden die de bsa-norm met behulp van de wizard Grafiek in Microsoft Excel .

16

Teken de punten gemeten vanaf het antilichaam verdunningen in het Excel- grafiek . Lees de bijbehorende concentratie van eiwit volgens de waarde van de y - as voor de antilichaamverdunning punt op de Excel- grafiek .
17

Afhankelijk van of u met behulp van de verkregen uit Tube A , B waarden of C , vermenigvuldig de waarde door een van beide 20 , 40 of 500 , respectievelijk . De resulterende waarde is de concentratie van uw gezuiverd antilichaam .