Hoe gebruik Sanger Reagentia

Sanger 's reagens wordt gebruikt om te helpen bij het bepalen van de volgorde van de aminozuren waaruit een peptide . Het reagens zal inhaken op - of tag - het aminozuur aan het einde van een peptideketen , ook bekend als de N - terminus . Het peptide kan vervolgens in stukken gebroken ( gehydrolyseerd ) en de afzonderlijke aminozuren bestudeerd vanuit verschillende chromatografiemethoden . Welke aminozuur draagt ​​het label is een aan het uiteinde . Sanger 's reagens is ook bekend als dinitrofluorbenzeen ( DNFB ) . Zodra het is vergrendeld op een aminozuur , is er sprake van een DNP - compound.Things je nodig hebt
laboratoriumschaal
Handschoenen
veiligheidsbril
Centrifuge
Centrifugeerbuizen
pasteurpipetten
Gedistilleerd water
4,2% oplossing van natriumbicarbonaat
Sanger 's reagens ( FDNB ) op pH-papier
Diethylether
6M zoutzuur
Aceton Electronics Test tube
Toon meer instructies
1

Weeg 3 miligrams van peptide op een schaal . Plaats het in een centrifugebuis . Voeg ongeveer 0,3 ml water , 0,3 ml Sanger reagens en 0,075 ml natriumbicarbonaat .
2

Laat de centrifugebuis te incuberen bij kamertemperatuur gedurende een uur . Tijdens de incubatie schud de buis te voorkomen dat het mengsel uit scheiden . Controleer de pH van de oplossing elke 15 minuten met pH-papier . De pH moet dan 9 gehouden . Als het begint te dalen , een kleine hoeveelheid natriumbicarbonaat ( ongeveer een druppel met de Pasteur pipet ) .
3

Na de incubatie , voeg 1,5 ml water en een gelijke hoeveelheid ether . Laat de oplossing scheiden in lagen . Het kan zijn dat het mengsel te scheiden centrifuge . Verwijder de ether laag ( de bovenste , gele laag ) met een pipet en gooi hem weg .
4

Stel de pH omlaag naar 1,0 door langzaam toevoegen van zoutzuur . Voeg een beetje zuur tegelijk , roer voorzichtig , controleer dan de pH met een pH- papier . In totaal moet het ongeveer 0,15 ml zuur vereisen . Indien de pH kleiner dan 1,0 , een kleine hoeveelheid ( niet meer dan een druppel ) natriumbicarbonaat .
5

Voeg 3 ml ether . Laat het mengsel te scheiden . Nu is de bovenste laag ( de gele , ether laag ) bevat uw DNP - verbinding. Met behulp van een pipet , zorgvuldig uit deze laag en overbrengen naar een schone reageerbuis. Plaats de reageerbuis opzij en laat de vloeistof te laten verdampen , met achterlating van een droge , gele vaste stof .

Was
6 uw vaste stof met aceton . Voeg 0,3 milliliter aceton , roer voorzichtig en haal de vloeistof met een pipet . Voeg 0,75 milliliter zuur aan de reageerbuis . Uw peptide wordt nu gelabeld en klaar om te worden gehydrolyseerd en geanalyseerd met de chromatografie methode van uw keuze.