Hoe een Bis - Tris Transfer Buffer Voeg

De koppeling van bis -tris is belangrijk biochemie vanwege zijn vermogen om als een zwitterion , bezit een positieve en negatieve ionen in het molecuul . Het kan dienen als een buffer in het gebied van pH 7,6 . Het wordt toegevoegd aan de gel in elektroforese helpen de moleculen in oplossing en helpt bij de scheiding van de moleculen . Transfer buffers verwijderen moleculen uit gelplaten van elektroforese analyse en overbrengen naar membranen voor western blotting . Elke fabrikant van elektroforeseapparaat rapporten enigszins verschillende recepten voor het maken van een transfer buffer , maar de volgende is voor de overdracht buffer gebruikt met NuPAGE systemen op niet - gereduceerde samples.Things je nodig hebt
Bicine
Bis -tris
EDTA
250 ml bekerglas
Methanol
1000 ml fles
ultrapuur water
Toon meer instructies
1

Bereid de ingrediënten voor de buffer door weging de hoeveelheden van elke component op een analytische balans . De drie droge componenten voor een transfer buffer bicine , bis -tris en EDTA . Gewicht out 4.08 gm bicine , 5,23 g bis- tris en 0,29 g EDTA op afzonderlijke wegingen papers . Kopen van 2

Voeg deze componenten in een bekerglas van 250 ml . Los deze componenten met 100 ml methanol . Roer tot de vaste stoffen oplossen.
3

Breng de opgeloste bestanddelen in een 100 ml fles en was bekerglas met ultrapuur water om de overdracht van alle bestanddelen te garanderen .
4

Vul de rest van de 1 - liter volume met ultrapuur water . Voeg het water in porties die voldoende menging tussen elke toevoeging toe te staan. De inhoud grondig te mengen tot een uniforme concentratie bereiken .